Pengembangan dan Karakterisasi Sistem Kromosom Bakteri Buatan yang Dapat Diinduksi untuk Mempelajari Replikasi Litik dan Patogenesis Virus Herpes Terkait Sarkoma Kaposi

ABSTRAK
Kromosom buatan bakteri (BAC) digunakan secara luas untuk memanipulasi genom virus herpes dan menghasilkan virus rekombinan. Di sini, kami mengembangkan BACmid KSHV baru, yaitu iBAC, dengan mengganti EGFP dengan transaktivator TET3G di bawah promotor EF1α dan menyisipkan elemen respons Tet dalam promotor RTA pada klon BAC16 KSHV asli dan mengkarakterisasi replikasi litik KSHV dalam sel SLK-iBAC. Sel SLK-iBAC mengembangkan replikasi litik yang lebih efisien dan menghasilkan lebih banyak virus keturunan daripada sel iSLK-BAC16 pada kondisi pengobatan doksisiklin yang sama. Karena sel SLK-iBAC hanya menempati penanda seleksi higromisin, mudah untuk menghasilkan penghapusan gen seluler melalui CRISPR-Cas9 yang dimediasi lentivirus atau mengekspresikan gen virus atau seluler secara stabil melalui lentivirus diikuti oleh seleksi antibiotik, menjadikan sistem iBAC alat yang lebih baik untuk mengidentifikasi target seluler protein virus dalam konteks infeksi virus atau mempelajari peran gen virus atau seluler untuk replikasi litik dan patogenesis KSHV. Selain itu, iBAC bebas warna dan dapat digunakan untuk melacak lokalisasi subseluler protein virus atau kolokalisasi antara protein virus yang berbeda dengan memasukkan protein fluoresen fusi ke dalam tulang punggung BAC. Oleh karena itu, iBAC KSHV yang baru merupakan alat induksibel yang kuat untuk mempelajari replikasi litik dan patogenesis KSHV dalam model sel.